內容簡介

　　本書以蛋白質、核酸、醣類、脂質等生物分子的分離純化、結構與功能分析為主要內容，同時也包括了蛋白質體學、基因工程、基因轉殖動物技術及基因剔除分析實驗等當代最新的實驗方法。對於每一種實驗方法，作者都深入地介紹其實驗原理，詳細介紹其實驗操作程序，並對實驗中可能出現的問題進行討論。本書「探索式」的實驗設計；有別於一般「食譜範本式」的實驗課程，是研讀生物化學與分子生物學的大學生及研究生最佳的實驗課程教材，及進入研究工作的訓練工具書。

序言

　　本人受託審核校正「生物化學與分子生物學實驗課程」繁體中文版。此書為中國北京高等教育出版社集合北京大學及其他重點大學生化及分子生物教學及研究人員為大學本科生（大學部）及研究生編撰而成的實驗教材。作者團隊試圖以新的「探索研究式」的實驗設計，取代傳統「食譜範本式」的實驗課程，從這個出發點可看出本書確實具有國內一般實驗教材所沒有的優點及特色。

　　全書包含了31個實驗章程，其中只有前十個實驗適合大學部的實驗內容，其餘的實驗則針對大學部資優生及研究所層次的碩、博班研究生。後半部的這些較為高深的實驗是集中於一些最近十餘年來發展出來的研究新技術。值得一提的是，實驗14的基質輔助雷射解吸／電離飛行時間質譜（MALDI-TOF）及實驗15電噴霧串聯質譜法（Electrospray Ionization, ESI），這兩項突破性的蛋白質體分析技術發明甫於2002年獲得諾貝爾化學獎，而國內也僅有幾個研究機構具有此等設備。另外如實驗30的RNA干擾技術（RNAi）及實驗31的酵母菌雙雜交（yeast two-hybyid system）相信目前對大學部學生都是十分陌生的，大學部的教科書也絕少提及，諸如此等歐美日先進研究室所採用的突破性重要研究工具在本書內已付諸執行於實驗課程，實在難能可貴；值得台灣之生化教學研究同仁參考。

　　近年來生化科技發展普為各國重視，亞洲國家如南韓、新加坡及中國進步尤為神速，生化科學教材的改革應是重要因素之一。國內生命科學研究所發展亦日見蓬勃，尤其報考生化科學及分子生物研究所的入學競爭十分激烈，熱門的生化研究所錄取率均低於10％。初試錄取的考生雖然對記憶性的教科書題材，應付自如，但碰到實驗性的教材則一片空白，導致入學後的研究生論文研究訓練構成瓶頸，部份研究生對生化實驗技術的瞭解，付之闕如，往往不能適應研究生最主要的研究工作，中途而廢，辦理休學的人數日益增加，值得吾等從事生化科技人才培育工作者思考改進的方案！如本書作者強調，生物化學與分子生物學的發展有別於一般自然科學如數學、物理等注重理論推演，在生化課程中的很多重要觀念及相關原理是只有在研究室的實驗中才能體會、掌握的，如果只是停留在課程的記憶性教材的背誦，即使學習認真，考試得高分順利進入研究所，對日後的研究生涯必然造成極大的挫折。因此建議有志嚮往生化科技領域的學子利用寒暑假及課餘優先選擇有興趣的研究室，從觀摩實習中，參悟實驗技術的原理及技巧對日後的研究所進修必大有俾益；本人慎重推薦大學部或研究所同學進入實驗室之前是有必要先預讀這本實驗教材！

台大生化科學研究所
邱式鴻

作者簡介

◎邱式鴻　台大生化科學研究所教授

目次

緒論

生物化學與分子生物學實驗課課程

實驗1：動物細胞蛋白質的提取和含量測定

實驗2：真核細胞染色體DNA的提取及含量測定

實驗3：細胞中醣類化合物的提取及成分鑑定

實驗4：離子交換管柱層析法分離蛋白質

實驗5：SDS-凝膠電泳測定蛋白質相對分子質量

實驗6：IEF電泳測定蛋白質等電點

實驗7：胰蛋白酶的動力學研究

實驗8：胰島素與腎上腺素對血糖濃度的影響

實驗9：質體DNA的微量製備（鹼裂解法）

實驗10：大腸桿菌勝任細胞的製備及DNA分子導入受體細胞

實驗11：蛋白質高效液相層析分析及氨基酸組成分析

實驗12：親和層析純化乳酸脫氫

實驗13：固相pH梯度IEF-SDS蛋白質體二維凝膠電泳分析

實驗14：銀染蛋白質點MALDI-TOF肽質量指紋圖分析及利用資料庫進行蛋白質鑑定

實驗15：電噴霧串聯質譜法測定蛋白質多肽的相對分子質量和氨基酸序列

實驗16：蛋白質N端手工氣相序列分析

實驗17：蛋白質毒素的 I標記及與受體結合實驗

實驗18：手工Fmoc法固相多胜肽化學合成

實驗19：免疫轉印技術與酶聯免疫吸附測定法

實驗20：核酸轉印技術

實驗21：PCR基因擴增實驗

實驗22：轉殖基因動物技術

實驗23：真核生物mRNA的純化和cDNA資料庫的建構

實驗24：重組DNA序列在原核細胞中的表現

實驗25：蜘蛛毒素HWTX-I在原核表現系統pET-b/BL21（DE3）pLysS中的表現與分離純化

實驗26：脂質過氧化物測定方法

實驗27：脂褐素含量測定方法

實驗28：重組質體DNA動物體內導入法

實驗29：核酸酶保護反應

實驗30：利用RNAi技術鑑定基因功能

實驗31：酵母雙雜交技術相關基礎實驗

附錄